NGSライブラリコンストラクションワークステーションの操作プロセス

NGS（次世代シーケンス）ライブラリビルディングワークステーションの動作ステップには、通常、複数の複雑な分子生物学プロセスが含まれ、DNAまたはRNAサンプルを高スループットシーケンサーに適したライブラリに変換することを目指しています。以下は、共通の原則に基づいてNGSライブラリビルディングワークステーションの操作手順の概要ですが、特定の手順は、さまざまなライブラリビルディング方法、サンプルタイプ、および使用される機器と試薬によって異なる場合があります。この記事の内容は参照用です。

NGSライブラリビルディングワークステーションの操作手順の概要

1。サンプル準備

1>サンプルを取得します：生物（細胞、組織、血液など）からDNAまたはRNAを抽出します。

2>品質管理：サンプルの品質と量を評価して、図書館の建設要件が満たされていることを確認します。

2。核酸断片化

1> DNAの断片化：DNAライブラリの構築の場合、物理的な方法（超音波、酵素切断など）は通常、DNAを特定の長さの小さな断片（200〜500bpなど）に打ち負かすために使用されます。

2> RNA断片化：RNAライブラリの構築、特にmRNAライブラリの構築の場合、最初にmRNA精製が必要であり、次に断片化が行われます（金属イオン、酵素治療などの使用など）。

3。修理と尾を終了します

1> DNA末端修復：末端修復酵素を使用して、5'末端のリン酸化と3'末端A処理を断片化したDNAの治療を行い、その後のリンカーの結紮を促進します。

2> RNA逆転写：RNAライブラリーの構築の場合、断片化されたRNAをcDNAに逆転写する必要があり、次にDNA様末端修復と尾鉱加工を実行します。

4。コネクタ接続

1>リンカー設計：シーケンスプラットフォームの要件に従って、適切なリンカーシーケンスを設計します。

2>リンカーライゲーション：DNAリガーゼを使用して、リンカーを処理されたDNAまたはcDNAフラグメントの両端に接続します。

5。ライブラリ増幅

1> PCR増幅：リンカーにリンクされたDNAまたはcDNAフラグメントは、ライブラリの標的配列の濃度を増加させるためにPCR反応によって増幅されます。

2>品質制御：品質制御が増幅されたライブラリで実行され、その濃度、純度、フラグメントサイズの分布が評価されます。

6。ライブラリの浄化

1>磁気ビーズ浄化：磁気ビーズやその他の方法を使用して、ライブラリの不純物（プライマー、塩イオンなど）を除去して、ライブラリの純度を改善します。

2>定量的検出：QPCRおよびその他の方法を使用して、精製ライブラリの定量的検出を実施して、後続のシーケンス中のサンプル割り当てを容易にします。

7。ライブラリの品質検査と保管

1>品質検査：最終ライブラリの品質検査を実施して、シーケンス要件を満たしていることを確認します。

2>ストレージ：その後のシーケンスのために、適切な条件（-20°Cまたは-80°Cなど）の下で資格のあるライブラリを保存します。

8。注意すべきこと

1>ライブラリの建設プロセス全体で、実験結果の精度と再現性を確保するために、実験条件（温度、時間、酵素量など）を厳密に制御する必要があります。

2>さまざまな図書館の建設方法（従来のライブラリ構築、トランスポサゼライブラリの構築、アンプリコンライブラリの建設など）の操作手順はさまざまです。実験的なニーズに応じて、適切なライブラリ構築方法を選択する必要があります。

3> NGSライブラリコンストラクションワークステーションを使用する場合、機器の指示と試薬運用ガイドラインを慎重に読み、研究所の安全操作手順に従う必要があります。

上記の動作手順から、NGSライブラリ構造ワークステーションの特定の動作ステップは、使用される機器モデル、試薬の種類、実験設計に大きく依存していることがわかります。したがって、機器サプライヤーの専門的な意見に相談するか、実際の実装の前に最新の科学文献を広くレビューして、詳細かつ正確な運用ガイドラインを取得することが重要です。このような事前作業は、実験プロセスの円滑な進行を確保し、実験結果の精度と信頼性を最大化することができます。