NGS自動ライブラリ構築プロセス

NGS自動ライブラリ構造とは、自動化技術と機器を使用したDNAまたはRNAサンプルのハイスループット、高効率、高精度ライブラリ構造プロセスを指します。このプロセスは、サンプル処理、DNA/RNA抽出、ライブラリの構築、品質管理までの複数のリンクをカバーし、手動の操作を削減し、実験効率と精度を向上させることを目的としています。

1。サンプル調製とDNA/RNA抽出

1。サンプル収集：細胞、組織、血液などのターゲットサンプルを収集して、サンプルの完全性と代表性を確保します。

2。サンプル処理：細胞溶解、組織粉砕などのサンプルタイプに従って適切な治療方法を選択して、DNAまたはRNAを放出します。

3。DNA/RNA抽出：適切な抽出方法（フェノールクロロホルム法、磁気ビード法、カラム法など）を使用して、サンプルから高品質のDNAまたはRNAを精製します。

2。ライブラリ構造

ライブラリ構造は、NGS自動化されたライブラリ構造の中心的なステップです。通常、次のサッツェが含まれます。

1。DNA/RNA断片化：

1>その後のシーケンス反応のために、DNAまたはRNA分子を小さな断片に切断します。断片化は、物理的な方法（超音波破壊など）または化学的方法によって達成できます。

2>フラグメントのサイズは、通常、シーケンスプラットフォームと実験要件に応じて、100〜1000塩基対です。

2。修理とa-tailを終了します：

1>断片化されたDNAまたはRNAの終了修復を実行して、末端損傷を除去し、リン酸塩基と3 '端子を追加します。これらの修復手順により、その後のライゲーションアプタマーとライブラリーの増幅が容易になります。

3。接続アプタマー：

1>修復されたDNAまたはRNAフラグメントを特定のアプタマー（リンカーとも呼ばれます）に接続します。アプタマーは、その後のPCR増幅および配列決定反応のための特定の配列を含むDNAまたはRNAフラグメントです。

2>自動ライブラリの構築プロセスでは、このステップは通常、自動化されたピペッティングと接続の反応を通じて達成されます。

4。ライブラリ増幅：

1> PCR増幅によりアプタマーにリンクされたDNAまたはRNAフラグメントを、シーケンスに使用できるライブラリを形成するのに十分な数に増加します。

2>アプタマー配列を備えたプライマーは、増幅プロセス中の特定の増幅に使用されます。

3。ライブラリの品質管理

ライブラリの品質管理は、ライブラリの品質とシーケンス結果の信頼性を確保するための重要なステップです。一般的なライブラリの品質管理方法は次のとおりです。

1。定量的PCR：ライブラリの濃度と増幅効率を検出するために使用されます。

2。ポリアクリルアミドゲル電気泳動：ライブラリーフラグメントのサイズ分布を評価するために使用されます。

3。質量分析分析：ライブラリの品質と純度をさらに検証するために使用されます。

4。関数：

1。自動操作：自動化された機器を介したサンプル処理やライブラリ構造などの手順を自動化して、手動介入を減らします。

2。効率の向上：自動化されたプロセスにより、実験サイクルが短くなり、実験効率が向上します。

3.エラーの削減：人間の操作によるエラーを減らし、実験結果の精度と安定性を改善します。