プロテオミクスのサンプル前処理

プロテオミクスのサンプル前処理は、プロテオミクス研究の主要なリンクであるだけでなく、その重要な位置はかけがえのないものです。それは、後続の実験データの精度と実験的結論の堅牢性を直接決定します。以下は、プロテオームサンプルの前処理のコアステップの詳細な説明です。

1。サンプルコレクション

プロテオミクスの研究では、サンプル収集は重要な最初のステップです。サンプルの代表性と一貫性を確保するには、次の原則に従う必要があります。

1。急速凍結：タンパク質の分解と汚染を避けるために、液体窒素や-80℃冷蔵庫など、できるだけ早くサンプルを低温環境に入れます。

2。均一性と一貫性：サンプルを収集する場合、実験結果の信頼性を確保するために、サンプルの均一性と一貫性を確保する必要があります。

3。ターゲットコレクション：さまざまな種類のサンプル（動物組織、微生物、細胞など）については、その特性に従って異なる収集方法を選択する必要があります。たとえば、ヒトで外科的に除去される組織の場合、PBS（リン酸緩衝生理食塩水溶液）を使用して血液をきれいにして除去できます。マウス、ラット、その他の動物の組織サンプルの場合、灌流を使用して血液を除去できます。

2。壊れたサンプル

サンプルの破壊は、タンパク質抽出の前に必要なステップであり、その目的は細胞内のタンパク質を完全に放出することです。粉砕サンプルの主な方法には、機械的断片化、温度差法、および圧力差法が含まれます。その中で、機械的断片化には、液体窒素研削、均質化、マスト法が含まれます。温度差法は、細菌などの細胞壁を含むサンプルに適用できます。圧力差法は、組織サンプルに適用できます。粉砕プロセス中に、低温環境を維持し、タンパク質の分解を防ぐためにプロテアーゼ阻害剤を追加する必要があります。

iii。タンパク質抽出

タンパク質抽出は、サンプルからタンパク質を分離することを目的として、プロテオミクス研究の2番目のステップです。高品質のタンパク質抽出物を取得するには、次の原則に従う必要があります。

1.適切なバッファーと溶媒を選択します。タンパク質を最大限に溶解します。

2。不純物を除去する：抽出プロセス中に、遠心分離やろ過による不純物を除去するなど、非特異的タンパク質の汚染を避けるようにしてください。

3。定量的および純度検出：抽出されたタンパク質は、その後の実験の精度を確保するために、定量的および純度検出である必要があります。

IV。タンパク質分離

タンパク質分離は、タンパク質の特性に応じてタンパク質を分離および精製することを目的として、プロテオミクス研究の3番目のステップです。一般的に使用されるタンパク質分離方法には、ゲル電気泳動、クロマトグラフィーなどが含まれます。分離プロセス中に、次のポイントに注意する必要があります。

1.適切な分離方法を選択します。たとえば、大規模なプロテオミクス研究の場合、実験目的に従って適切な分離方法を選択し、より高度な分離技術が必要になる場合があります。

2。一定の温度と適切なpHを維持する：実験結果の安定性を確保する。

3。品質管理の検出：分離されたタンパク質バンドまたはピークの場合、その後の識別の精度を確保するために、品質制御検出が必要です。

V.タンパク質識別

タンパク質の識別は、タンパク質のタイプ、構造、機能を決定することを目的として、プロテオミクス研究の最終ステップです。一般的に使用されるタンパク質同定方法には、質量分析技術と抗体検出が含まれます。識別プロセス中に、次のポイントに注意する必要があります。

1.適切な識別方法を選択します。たとえば、大規模なプロテオーム研究には、より効率的で敏感な質量分析が必要になる場合があります。

2。一定の温度と適切なpHを維持する：実験結果の安定性を確保する。

3.検証と繰り返し実験：特定されたタンパク質の場合、結果の信頼性と精度を確保するために、検証と繰り返しの実験が必要です。

6。注意すべきこと

1.繰り返しの凍結融解を避ける：タンパク質は冷たく加熱されているため、タンパク質の分解につながるため、実験中に繰り返し凍結融解を避ける必要があります。

2。低温環境を維持する：前処理プロセス全体で、タンパク質の分解を防ぐために低温環境を維持する必要があります。

3.汚染の防止：手術中に、きれいな手袋、ナイフ、ガラス板の使用など、汚染を避ける必要があります。

プロテオミクスのサンプル前処理は、複雑で洗練された包括的なプロセスです。実験結果の精度、信頼性、安定性を確保するために、一連の科学原則と微細な動作方法への厳密な順守が必要です。