リアルタイムの定量的PCR

リアルタイムの定量的PCR、フルネームリアルタイム定量PCR（QPCRと呼ばれるリアルタイム定量PCR）は、分子生物学の実験技術です。 PCR増幅技術と蛍光検出技術を組み合わせて、PCR増幅中に特定のDNAまたはRNA配列のコピー数をリアルタイムで監視および定量化します。

1.リアルタイムの定量的PCRの利点と短所

アドバンテージ：

1.高感度と特異性：QPCRは、核酸分子の極端な濃度が非常に低いことを検出し、標的配列を正確に識別できます。これにより、ウイルス量の検出など、臨床診断において特に重要になります。

2。強力な定量的能力：蛍光信号の蓄積を通じて、反応の進行をリアルタイムで監視することができ、それにより絶対的または相対的な定量化を達成できます。

3。高速かつ効率的：従来のPCRと比較して、QPCRは、通常1時間以内に短時間で大規模なサンプルの検出を完了することができます。

4。直感的なデータ：リアルタイム曲線チャートを通じて、研究者は増幅曲線を直感的に観察できます。これは、結果を簡単に分析および解釈することができます。

欠点：

1。より高いコスト：QPCR機器と蛍光色素は高価で、運用コストが高くなります。

2。高い技術的要件：オペレーターは、実験的なエラーを避けるために特定の専門知識とスキルを持つ必要があります。

3.汚染に適している：その感度が高いため、サンプルの汚染が不正確な結果につながる可能性があるため、厳密な実験条件が必要です。

2。リアルタイムの定量的PCRの機器組成

リアルタイムの定量的PCRシステムは、主に次の部分で構成されています。

1。QPCR機器：これは、PCR反応中の蛍光信号の変化を監視するために使用される蛍光検出システムを備えたコア機器です。

2。熱サイクラー：反応システムの温度変化を制御して、DNAの変性、アニーリング、伸長を達成します。

3。光学検出システム：反応チューブの蛍光信号を検出し、分析のために電気信号に変換するために使用されます。

4。ソフトウェア：データ収集、処理、分析に使用され、増幅曲線や標準曲線などの結果を生成します。

3。リアルタイムの定量的PCRの操作方法

操作方法には、主に次の手順が含まれています。

1。サンプル調製：サンプルからDNAまたはRNAを抽出し、逆転写酵素を介してRNAをcDNAに変換します。

2。反応系の調製：プライマー、プローブまたは染料、DNTP、TAQ酵素、緩衝液、テンプレート核酸などの成分の混合を含む。

3。反応条件設定：前提条件、周期的変性、アニーリング、拡張ステップなど、特定の実験的ニーズに応じて適切なPCR反応手順を設定します。

4。データの収集と分析：各サイクルの終わりに、機器は蛍光信号を自動的に記録し、ソフトウェアを介してデータ分析を実行して、サンプルの開始核酸量を計算します。

科学的研究と臨床診断では、リアルタイムの定量的PCRには幅広い用途があります。特定のコストと技術的障壁にもかかわらず、比類のない精度と効率性により、かけがえのないツールになります。科学的研究者と医療従事者にとって、この技術の操作手順と機器の使用方法を習得することは、実験効率とデータの精度を改善するための鍵です。