タンパク質精製ワークステーションの動作方法

タンパク質精製ワークステーションの動作方法には、多くの場合、複雑な混合物から標的タンパク質の効率的な分離を確保するためのいくつかの詳細かつ重要なステップが含まれます。以下は、参照のみの一般的な動作方法です。特定の操作の詳細は、機器モデル、浄化方法、実験要件によって異なる場合があります。

1。準備

1。サンプル準備：

1>細胞溶解物、組織抽出物、発酵スープなど、標的タンパク質を含むサンプルを収集および処理します。

2>標的タンパク質の特性によれば、核酸の除去、pHの調整、不純物の除去など、前処理が必要になる場合があります。

2。機器検査：

1>タンパク質浄化ワークステーションのすべてのコンポーネントが無傷であり、接続が正しく、電源が安定していることを確認してください。

2>精製媒体（クロマトグラフィーカラム、アフィニティクロマトグラフィーフィラーなど）が正しく取り付けられており、作業状態にあるかどうかを確認します。

3。バッファ準備：

1>実験要件によると、平衡バッファー、溶出バッファーなどを含むさまざまな濃度のバッファーを準備します。

2>バッファーの組成、pH、およびイオン強度が、標的タンパク質の特性と一致することを確認します。

2。サンプルの荷重

1。サンプルろ過：

1>適切なフィルター（0.22μmまたは0.45μmフィルター膜など）を使用して、サンプルから不純物と粒子を除去して、サンプルに透明で懸濁物質がないことを確認します。

2。サンプル荷重操作：

1>ロードシステムを介して、処理されたサンプルを精製ワークステーションに追加します。

2>機器の要件に応じて、流量、圧力、サンプル負荷などのパラメーターを調整します。

3。精製プロセス

1。バランス：

1>精製媒体を平衡バッファーですすぎ、媒体内の不純物と残留物を除去し、培地が安定した状態に到達できるようにします。

2>システムの安定した動作を確保するために、平衡プロセス中の流速と圧力の変化に注意してください。

2。吸着：

1>平衡後、標的タンパク質は、精製媒体上でリガンド（抗体、金属イオンなど）に結合し、複合体を形成します。

2>ターゲットタンパク質とリガンドの結合特性に従って、適切な吸着条件（温度、pH、イオン強度など）を選択します。

3。エルッジ：

1>ターゲットタンパク質を精製培地から分離し、溶出緩衝液の濃度を徐々に増加させるか、他の条件（pH、イオン強度など）を変更することにより、溶離感とともに流れ出します。

2>溶出プロセス中に、溶出条件を時間的に調整できるように、溶出曲線の変化に細心の注意を払ってください。

4。収集と検出

1。収集：

1>コレクターを使用して、溶出感のターゲットタンパク質を崩壊させます。

2>実験要件によると、濃度、液体の変化など、収集液のさらなる処理が必要になる場合があります。

2。テスト：

1>適切な方法を使用して、標的タンパク質の純度と濃度を検出します。一般的に使用される方法には、SDS-PAGEゲル電気泳動、クーマシーブライトブルー染色、紫外線分光光度測定などが含まれます。

2>結果データを記録および分析して、精製効果を評価します。

5。フォローアップ処理

1。データ処理：

1>検出結果に従って精製効果を分析し、実験条件を調整して精製プロセスを最適化します。

2>実験データを整理し、実験レポートを作成します。

2。機器の清掃とメンテナンス：

1>精製ステーションの精製後、すべての成分をきれいにしてきれいにして、残留物や汚れを除去する必要があります。

2>長期的で安定した動作を確保するために、機器を定期的に維持および維持します。

6。注意すべきこと

1.浄化プロセス全体で、実験的な人員と機器の安全性を確保するために、手術手順と安全仕様に厳密に従う必要があります。

2。精製媒体の選択と浄化条件の設定は、ターゲットタンパク質と実験的ニーズの特性に従って合理的に設計する必要があります。

3.実験中のさまざまなパラメーターの変更を観察および記録することに注意して、問題をタイムリーに発見および解決します。

さまざまなブランドやモデルのタンパク質浄化ワークステーションに運用上の違いがある可能性があるため、実際の動作では、特定の機器の運用マニュアルを参照するか、より詳細な運用ガイダンスについて機器サプライヤーに連絡する必要があります。