タンパク質抽出ステップ

タンパク質抽出ステップは、サンプルタイプの多様性、タンパク質のユニークな特性、および実験の特定の目標によって異なります。以下は、より一般的なタンパク質抽出ステップの概要ですが、実際の操作の特定の状況に従って調整する必要があります。

1。準備フェーズ

1.抽出ターゲットと材料を決定する：抽出する必要があるタンパク質の種類を明確にし、適切な生物学的サンプル（細胞、組織、体液など）を選択します。

2。抽出物と試薬の準備：タンパク質と実験的ニーズの特性に従って、適切な抽出物、バッファー、プロテアーゼ阻害剤などを準備します。

2。サンプル処理

1。サンプル収集：細胞サンプルの場合、遠心分離、ろ過などによって収集できます。組織サンプルの場合、カット、グラインドなどが必要です。

2。その他の材料の洗浄と除去：事前に冷却された生理食塩水またはPBSおよびその他の緩衝液を使用して、血液、培養培地などの不純物を除去します。

3。細胞または組織の亀裂

1.機械的粉砕：ホモジオ、モルタル、高速ティッシュマッシング機、およびその他の機器を使用して、細胞または組織を壊します。

2。身体的破壊：超音波破壊、凍結融解など、物理的な力を介した細胞または組織の破壊など。

3。化学的粉砕：酵素溶解、浸透圧の変化、その他の方法を使用して、細胞または組織を破壊します。

4。タンパク質抽出

1.抽出物の追加：通常は緩衝液、塩溶液、洗剤、その他の成分を含む、砕いた細胞または組織懸濁液に適切な量の抽出物を追加します。

2。攪拌してインキュベートする：吸い込みを静かに攪拌して、抽出物にタンパク質を完全に溶解し、必要に応じてインキュベートします。

3.遠心分離：不溶性物質、細胞の破片、その他の不純物などの不純物を除去するための懸濁液を遠心化します。上清は、粗タンパク質抽出溶液として収集されます。

V.精製と識別

1。精製：ニーズに応じて、塩漬け、ゲルクロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィーおよびその他の方法を使用して、粗タンパク質を精製できます。

2。同定：精製されたタンパク質は、電気泳動、クロマトグラフィー、質量分析、その他の方法によって同定され、その純度、分子量、構造、およびその他の特性を確認します。

6。注意すべきこと

1.温度を低く抑える：抽出プロセス全体で、タンパク質の変性を防ぐために、できるだけ温度を低く維持してみてください。

2。汚染を避ける：外因性物質の汚染を避けるために、実験装置の洗浄と滅菌操作に注意を払ってください。

3。適切な溶媒と条件を選択します。タンパク質と実験的ニーズの特性に従って、抽出と精製のための適切な溶媒と条件を選択します。

タンパク質抽出は間違いなく複雑で正確なプロセスです。動作の各ステップでは、異なるサンプルやタンパク質の絶えず変化する特性に対処するために正確な制御が必要です。さらに、科学技術の継続的な発展に伴い、新しいタンパク質抽出方法と技術が出現し続け、タンパク質研究の選択と可能性を増やしています。