タンパク質抽出方法

タンパク質抽出は、生化学と分子生物学で一般的に使用される技術であり、多様な生物サンプルから標的タンパク質を効率的に分離および精製するために広く使用されています。タンパク質のユニークな特性と実験の特定のニーズを考えると、科学者はさまざまな細かく効率的な抽出戦略を開発しました。いくつかの一般的なタンパク質抽出方法を以下に説明します。

1。水溶液抽出方法

1。原理：希釈塩と緩衝系の水溶液は、タンパク質に対する安定性と高い溶解度を持ち、タンパク質を抽出するために最も一般的に使用される溶媒です。

2。ステップ：

1>適切な溶媒（通常の生理食塩水、リン酸緩衝液など）を選択すると、通常、原料の量の量は1〜5倍です。

タンパク質溶解を促進するために均等に攪拌します。

2>The extraction temperature depends on the properties of the active ingredient.一般に、タンパク質の変性を防ぐために、低温（5℃未満）操作が使用されます。

タンパク質の分解を避けるために、タンパク質分解酵素阻害剤（蛍光酸ジイソプロピル、ヨード酢酸など）を追加できます。

2。有機溶媒抽出法

1。原理：脂質に比較的しっかりと結合している、または分子により多くの非極性側鎖を持っているいくつかのタンパク質は、水溶液には不溶ですが、エタノール、アセトン、ブタノールなどの有機溶媒に可溶です。

2。ステップ：

1>抽出溶液として適切な有機溶媒を選択します。

2>タンパク質の変性を防ぐために、低温で動作します。

3>攪拌、揺れなどでタンパク質溶解を促進します。

4>抽出物のタンパク質を遠心化します。

3。塩漬け方法

1。原理：水溶液中のタンパク質の溶解度は、塩濃度の影響を受けます。中性塩は、水中のタンパク質の溶解度を低下させ、沈殿させて沈殿させることができます。

2。ステップ：

1>硫酸アンモニウムや硫酸ナトリウムなどの飽和中性塩溶液をタンパク質溶液に加えます。

2>塩濃度が増加すると、タンパク質は徐々に沈殿します。

3>沈殿したタンパク質の遠心。

IV。超遠心分離

1。原理：勾配液体中の異なる粒子の異なる堆積速度を使用して、タンパク質分離と精製を実現します。

2。ステップ：

1>密度勾配溶液（スクロース、グリセロールなど）を準備します。

2>勾配溶液の上にタンパク質溶液を置きます。

3>密度勾配に応じてタンパク質を分布させるために超遠心分離を実行します。

4>層の異なる密度でタンパク質を収集します。

V.ゲルクロマトグラフィー

1。原理：ゲルの分子ふるいを使用して、タンパク質分子のサイズに応じて分離します。

2。ステップ：

1>ゲルをクロマトグラフィーカラムに詰め、適切な解で平衡化します。

2>タンパク質溶液をクロマトグラフィ列に追加し、ゲルに拡散させます。

3>タンパク質分子はサイズの順に溶出され、異なる期間の溶出物が収集されます。

6。アフィニティークロマトグラフィー

1。原理：生物学的高分子間の専用の親和性を使用して分離します。

2。ステップ：

1>固相マトリックスに特定の親和性（抗体、酵素阻害剤など）を持つリガンドを固定化します。

2>タンパク質溶液をクロマトグラフィーカラムに通し、標的タンパク質をリガンドに結合します。

3>洗浄して、非結合タンパク質を除去します。

4>溶出条件（pH、イオン強度など）を変更して、標的タンパク質がリガンドから解離して収集されるようにします。

7。注意すべきこと

1.タンパク質の変性を防ぐために、抽出プロセス中に低温を維持します。

2。タンパク質の安定性と溶解度を確保するために、適切な溶媒と条件を選択します。

3.抽出されたタンパク質を精製し、識別して、その純度と活性を確認する必要があります。

上記は、いくつかの一般的なタンパク質抽出方法です。選択される方法は、タンパク質の性質、実験の目的、実験条件に依存します。実際の操作では、特定の状況に応じて調整と最適化が必要になる場合があります。