定量的PCR

定量的PCR（QPCR）は、DNAポリメラーゼ連鎖反応（PCR）テクノロジーを使用して標的DNAの数を定量化する方法です。この方法は、医学的診断、遺伝子発現研究、遺伝分析、ウイルス滴定において幅広い応用値を持っています。

1。定義と原則

定量的PCRは、サンプル内の元のテンプレートの数を推定するように設計されています。その原則は、PCR増幅の規則性に基づいています。 PCR増幅の指数期間中、増幅された製品の量を測定することにより、元のテンプレートの数が逆転します。具体的には、増幅された製品量nとPCR増幅の効率Eがわかっている場合、元のテンプレートNOの値は式を使用して計算できます。

リアルタイムの蛍光定量PCR（FQ-PCR）では、蛍光化学物質も導入され、PCR反応が進むにつれて蛍光信号強度が等しい割合で増加します。蛍光しきい値を設定し、サイクルしきい値（CT値）を測定することにより、つまり、セットしきい値に達すると蛍光信号が発生するサイクルの数を測定することにより、開始DNAテンプレートの数をさらに正確に計算できます。

2。実験手順

定量的PCR実験には通常、次の重要な手順が含まれます。

1。準備試薬：テンプレートDNA、プライマー（前方プライマーおよびリバースプライマー）、DNAポリメラーゼ、DNTP（4つのデオキシヌクレオチド）、バッファーおよびMgCl2などを含む。

2。反応システムを構築します：テンプレートDNA、プライマー、DNAポリメラーゼ、DNTP、バッファー、MGCL2を混合して、PCR反応溶液を得ます。

3. PCR増幅条件の最適化：温度条件とPCRサイクル数を調整して、PCR反応が最適な条件の下で実行されるようにします。

4。PCR増幅：変性、アニーリング、拡張の3つのステップを含み、複数のサイクルを介してターゲットDNAの指数関数的増幅を実現します。

5. PCR産物の検出：ゲル電気泳動、蛍光定量PCR、またはリアルタイム定量PCRによって実行できます。リアルタイムの定量的PCRは、PCR反応の進行をリアルタイムで監視し、PCR産物の量を正確に測定する能力で人気があります。

3。技術的な特性

1.高感度：定量的PCRは、マイクロサンプルの分析に適した非常に低い濃度のDNAテンプレートを検出できます。

2。特異性：特定のプライマーの設計により、PCR反応がターゲットDNA配列のみを増幅することを保証できます。

3。定量的精度：蛍光定量化技術と組み合わせて、開始DNAテンプレートの数の正確な定量化を達成できます。

4.広く使用されている：医学診断、遺伝子発現研究、遺伝子分析、ウイルス滴定に重要なアプリケーションがあります。

4。アプリケーションの見通し

バイオテクノロジーの継続的な開発により、定量的PCRは科学的研究と臨床診療においてより広範なアプリケーションの見通しを持っています。特にウイルス滴定の観点から、QPCR技術は、汚染と再現性の急速で敏感な確率が低いため、多くのウイルス検出の最初の選択肢となっています。さらに、定量的PCRは、遺伝子発現研究、遺伝子分析などの分野でかけがえのない役割も果たします。

上記から、定量的PCRは重要な分子生物学技術であり、多くの分野でのアプリケーションの見通しは楽しみにしていることがわかります。技術の継続的な進歩と改善により、定量的PCRは将来の科学的研究と臨床研究においてより重要な役割を果たすと信じています。