DNA精製方法

DNA精製は、生物学と分子生物学の分野の重要なステップであり、複雑なサンプルからさまざまな不純物を正確に分離および除去して、高品質の高品質のDNAを取得することを目的としています。このプロセスは、その後の分子分析、クローニング、シーケンス、および遺伝子発現研究のために重要です。次に、いくつかの一般的なDNA精製方法を紹介します。

1。フェノール/クロロホルム法

1。原理：DNAとフェノールおよびクロロホルムとの互換性、および高塩濃度での水中のDNAとRNAの不溶性の性質に基づいています。

2。ステップ：

1> DNAサンプルはフェノールと混合されます。

2>クロロホルムを追加し、遠心分離によってDNAを分離します。これは明確な白い層として現れます。

3>抽出されたDNAを洗浄して乾燥させ、最終的に純水に加えて再懸濁します。

3。特徴：タンパク質やその他の不純物を効果的に除去できますが、手術は比較的面倒であり、有毒フェノールとクロロホルムの使用が必要です。

2。エタノールまたはイソプロパノール沈殿法

1。原理：エタノールまたはイソプロパノールを使用して誘電率を減らし、核酸の親水性を減らし、溶液から沈殿させます。

2。ステップ：

1>溶液に2巻2巻または等量の室温イソプロパノールを追加します。

2>核酸沈殿物の遠心。

3>塩で沈殿物を70％エタノールで洗浄して塩を除去します。

4>核酸ペレットを乾燥させ、きれいな水性緩衝液で再懸濁します。

3。機能：低コスト、単純な操作ですが、長い時間であり、手動で実行する必要があります。

3。シリコンカラム法

1。原理：シリカゲルカラムのシリカゲルは、DNAに対して非常に高い親和性を持ち、DNAを吸着させ、不純物を除去できます。

2。ステップ：

1> DNAサンプルは酵素的に治療されました。

2>シリカゲルカラムを介して、DNAはシリカゲルに吸着され、不純物が除去されます。

3>適切なアルコール降水方法を使用して、シリカゲルカラムから純粋なDNAを洗い流します。

3。特徴：高速かつ効率的で、大規模なDNA精製に適しています。

IV。塩ベースの方法

1。原理：塩濃度の変化を使用して、高塩濃度でシュウ酸沈着沈殿を形成し、エタノール沈殿によって塩濃度を洗浄および減少させて、最終的に純粋なDNAを取得します。

2。ステップ：

1> DNAサンプルを高塩溶液と混合します。

2> DNA沈殿を促進するために、低塩濃度の溶液を追加します。

3>エタノール沈殿法で洗浄し、塩の濃度を減らします。

4>純粋なDNAを得るために乾燥します。

3。機能：シンプルで使いやすいですが、塩を完全に除去するには複数の洗浄が必要になる場合があります。

5。磁気ビード法

1。原理：機能的な磁気ビーズは、DNAを認識して結合し、磁場から磁気ビーズを収集し、不純物を除去できます。

2。ステップ：

1> DNAサンプルは酵素的に治療されました。

2>機能化された磁気ビーズを追加すると、磁気ビーズがDNAに結合します。

3>不純物を除去するために、磁場から磁気ビーズを集めます。

4>洗浄および乾燥して、純粋なDNAを取得します。

3。機能：高速で効率的で、自動的に操作しやすい。

6。ゲル電気泳動およびスピンカラム精製法

1。原理：最初に、関心DNAはアガロースゲル電気泳動により他の核酸および汚染物質から分離され、次にDNAはスピンカラム精製キットを使用してゲルから回収されます。

2。ステップ：

1>アガロースゲル電気泳動を実行して、関心のあるDNAバンドを傍受します。

2>スピンカラム精製キットを使用して、ゲルからDNAを精製します。

3>純粋なDNAは、結合、洗浄、溶出段階によって得られます。

3。機能：ゲルから特定のサイズのDNAフラグメントをリサイクルするのに適していますが、操作は比較的複雑で、時間がかかります。

DNA精製には多くの方法があり、それぞれに利点と短所があります。浄化方法を選択するときは、実験の特定のニーズと条件に従って包括的に考慮する必要があります。