プラスミドDNAの抽出

プラスミドDNAの抽出は、分子生物学における基本的かつ重要な実験技術であり、細菌などの宿主細胞からプラスミドDNAを分離および精製するプロセスを伴います。プラスミドは、外来遺伝子をバクテリアに運ぶための主なベクターであり、増幅または発現しており、遺伝子工学、遺伝子療法、ワクチン発達、その他の分野で広く使用されています。以下は、プラスミドDNA抽出のための詳細な手順と予防策です。

1。プラスミドDNAの概要

プラスミドは、染色体外の安定した遺伝因子です。通常、二本鎖、閉ループDNA分子であり、スーパーヘリックス状態の宿主細胞に存在します。プラスミドサイズは1〜200 kbの範囲であり、主に細菌、アクチノ菌、および真菌細胞に見られます。独立して再現して転写し、子孫細胞に一定のコピー数を維持し、それが抱える遺伝的情報を表現する能力があります。

2。プラスミドDNA抽出の基本的なステップ

細菌からプラスミドDNAを分離する方法には、通常、3つの基本的なステップが含まれます。細菌を培養してプラスミドを増幅し、細胞を収集して収集し、プラスミドDNAを分離および精製します。以下は、プラスミドDNAの抽出プロセスを詳細に導入するための例として、アルカリ切断を使用しています。

1.細菌を栽培してプラスミドを増幅します

1>適切な細菌株（E.coliDH5αなど）およびプラスミドベクター（PUC19など）を選択します。

2>適切な抗生物質（アンピシリンなど）を含むLB液体培地に細菌を接種し、プラスミドが細菌で増幅できるように37°C（約12〜14時間）で一晩インキュベートします。

2。セルを収集して溶解します

1>一定量の細菌溶液を採取し、遠心分離して上清を除去し、細菌の沈殿を収集します。

2>アルカリ溶解法を使用して、細菌細胞を溶解します。一般的に使用される試薬には、溶液I（細胞膜の完全性を維持するために使用されるグルコース、Tris-HCl、およびEDTAを含む）、溶液II（細胞膜を破壊し、DNAを変性させるために使用されるNaOHおよびSDSを含む）、および溶液III（NAOHを中和化し、プロトンとクロモソームのDNAを中和させるために使用されるKACおよび氷河酢酸を含む）が含まれます。

3>細菌細胞は溶解し、プラスミドDNAは一連の穏やかな手術（穏やかなフリップ、氷上の配置など）を通じて放出されます。

3。プラスミドDNAを分離して精製します

1>細胞の破片と染色体DNAの沈殿を除去し、プラスミドDNAを含む上清を収集する遠心分離機。

2>フェノールクロロホルム - イソアミルアルコール混合物およびその他の試薬を使用して、プラスミドDNAをさらに精製してタンパク質やその他の不純物を除去します。

3>無水エタノールまたはイソプロパノール沈殿によりプラスミドDNAを回収し、適切なバッファー（TEバッファーなど）に溶解します。

3。注意すべきこと

1。操作仕様：抽出プロセス全体で、外因性DNAの汚染を避けるために、滅菌仕様を厳密に守る必要があります。

2。試薬の選択：高品質の試薬と消耗品を選択して、実験の精度と再現性を確保します。

3。状態制御：実験条件（温度、時間、pHなど）の制御に注意して、最良の抽出効果を得る。

4。安全保護：有毒または有害な試薬を使用する場合、個人的な保護と実験室の安全対策を講じる必要があります。

4。概要

プラスミドDNAの抽出は、分子生物学における重要な実験技術です。このプロセスには、細菌培養、細胞溶解、DNA精製などの複数のステップが含まれます。厳密な動作仕様と条件付き制御により、高純度と高品質のプラスミドDNAを取得することができ、その後の実験的研究に強力なサポートを提供します。