RNAを抽出する手順

生物科学の膨大な調査では、RNA抽出は間違いなく人生の謎を解き放つための重要なステップであり、すべてのリンクには慎重な計画と実行が必要です。細胞、組織、またはその他の生物学的サンプルから貴重なRNA分子を効率的かつ純粋に分離するには、次の一連の厳密で細心の動作手順に従う必要があります。

1。実験準備

1.試薬と機器の準備：遠心チューブ、ピペット、細胞スクレーパー、モルタル、液体窒素、RNAプロテクター、TRIzol試薬、クロロホルム、イソプロパノール、75％エタノール、レースフリーの水などなど、実験に必要なすべての試薬と機器を準備します。

2。安全保護：実験の安全性を確保するために、実験用衣服や保護眼鏡などの必要な保護対策を身に着けてください。

3.実験手順を読む：実験手順を注意深く読んで、実験プロセスと結果を記録するために記録帳を準備します。

2。サンプルの収集と処理

1.サンプルの選択：細胞、組織、血清、尿などの実験要件に従って適切なサンプルを選択します。サンプルが代表的であることを確認し、RNA保護剤をすぐに追加してRNA分解を防ぎます。

2。サンプル貯蔵：RNAの完全性を維持するために、低温条件（液体窒素や-80°C冷蔵庫など）で収集されたサンプルを収集しました。

3。細胞の崩壊

1.機械的粉砕：高速遠心分離機、超音波、または液体窒素凍結などの機械的手法を使用して細胞を破壊します。組織サンプルの場合、サンプルは、事前に冷却されたモルタルを使用して粉末に接地できます。

2。化学的崩壊：適切な量の細胞溶解物（Trizol試薬など）を細胞または組織サンプルに追加し、細胞が完全に溶解するまで細胞スパチュラでサンプルを繰り返しピペットします。

4。RNA抽出

1。層状：等量のクロロホルムを細胞溶解物に加え、完全に混合してから遠心分離します。遠心分離後、サンプルは3つの層に分割されます。上層は無色の水相（主にRNAを含む）、中間層はDNAを含む層であり、下層は有機層です。

2。水相を伝達する：中間層と有機層の吸入を避けるために、上部水相を新しい遠心管に慎重に移します。

3. RNAを沈殿させる：等量のイソプロパノールを水相に加え、完全に混ぜてから遠心分離して、RNAを遠心管の底に沈殿させます。

4。RNAを洗浄：上清を注意深く注ぎ、RNA沈殿物を75％エタノールで洗浄して、イソプロパノールおよびその他の不純物を除去します。

5。乾燥RNA：換気された場所で遠心性チューブを乾燥させるか、吸収性紙で残留エタノールを吸います。 RNAを完全に乾燥させないように注意してください。

V. RNAを溶解します

1. RNAの溶解：適切な量のRNaseを含まない水または緩衝液を遠心性チューブに加え、RNAの沈殿を溶解するために静かに吸引して鼓動します。

2。加熱と溶解：遠心管を70°Cの水浴に入れ、しばらく加熱してRNAを完全に溶解します。

6。RNAの定量化と保存

1。RNAの定量化：紫外線吸収分光法または蛍光分析器を使用して、RNAの濃度と純度を決定します。

2。RNAの保存：-80°Cの低温条件でRNAを保存するか、RNAの分解と汚染を避けるためにRNase阻害剤およびその他の物質を加えます。

7。注意すべきこと

1. RNase汚染を防ぐ：RNase（RNase）は環境に広く存在し、RNAを分解する可能性があります。したがって、RNAを抽出するプロセス全体で、RNaseのないプラスチック製品とガラス製品を使用する必要があり、RNase汚染を防ぐために新しい手袋を頻繁に交換する必要があります。

2。実験条件の制御：RNAはアルカリ条件下で分解しやすいため、RNA抽出はpH未満の条件下で実行する必要があります。同時に、RNAの分解を防ぐために、実験中に低温条件を維持することに注意を払う必要があります。

3.操作の詳細に注意してください：水相を移動し、RNAを沈殿させ、RNAを洗浄する段階では、RNAの喪失や不純物の導入を避けるために慎重な手術を実施する必要があります。

この記事は、RNA抽出プロセスの1つの基本的な動作のみを提供します。特定の実験的ニーズを満たす、より専門的で効率的でRNA抽出のために、実験オペレーターが権威ある専門帳、最新の研究論文、または公式の技術資料を参照することをお勧めします。さまざまな実験の特定の目標は、試薬の使用量、抽出温度、特定のステップを延長または短縮する時間の異なる調整に直接つながるためです。